City of slums: self-organisation across scales

The city is certainly a fine example of a complex system, where the parts can only be understood through the whole, and the whole is more than the simple sum of the parts. In the present paper we explore the idea that some of these parts are themselves complex systems and the interrelation between complex subsystems with the overall system is a necessary issue to the understanding of the urban complex system. Spontaneous settlements are clear examples of complex subsystems within a complex urban system. Their morphological characteristics combined with their development process are traditionally understood as chaotic and unorganised. And so are Third World cities, traditionally known for their inherent chaotic and discontinuous spatial patterns and rapid and unorganised development process. The paper consists in a brief theoretical analysis developed on the interrelationship between two urban processes across scales: the local process of formation of inner-city squatter settlements and the global process of urban growth. What is the role that spontaneous settlements play in the global dynamics of the city? We explore this issue by analysing experiments of ‘City-of-slums’, an agent-based model that focuses on the process of consolidation of inner-city squatter settlements within a peripherisation process. The paper also includes two previous studies on these topics where the dynamics of these two urban processes are examined as two isolated complex systems and an analysis of the morphological fragmentation of the distribution of spontaneous settlements within the overall city and within the spontaneous settlements themselves. Based on these analyses, we conclude with a brief discussion on the role of self-organisation in the socio-spatial dynamics of Third World cities

the differentiated effect of implicit vs. explicit nudges

Behavioral sciences, and particularly nudges, are becoming increasingly relevant in the definition of policies designed to prompt desirable societal outcomes, namely in the health domain. This research studies the impact of two different nudge interventions in the choice of healthy food items: a social norm (with an explicit nature) and background music (sensory-based, with an implicit nature). The research also investigates the continued influence of these interventions in subsequent moments of choice. A digital experiment was conducted, and results confirm the strength of the social norm as an effective nudge. However, the proposed sensory-based nudge was not successful – future replication studies need to be conducted. Interestingly, we observe a consistency effect under the presence of either stimuli, meaning that people exposed to the stimuli perpetuate either the healthy or the unhealthy behavior in subsequent choices regardless of the nudge-type. Possible explanations and managerial implications are further explored

Microcytic anemia factor no estudo das anemias microcíticas

A anemia ferropénica e a β-Talassemia menor são as anemias microcíticas mais frequentes na prática laboratorial, sendo o seu diagnóstico de extrema importância clínica. O objectivo deste estudo consistiu na análise do poder discriminatório do MAF na caracterização destas anamias. Foi desenvolvido um estudo caso-controlo, tendo sido analisados os hemogramas de um grupo de 47 indivíduos com anemia ferropénica e 37 com β-talassemia, e de um grupo controlo constituído por 58 indivíduos saudáveis. Na diferenciação dos grupos patológicos, apenas a Hemoglobina, o VGM e o RDW apresentaram diferenças significativas. O MAF não demonstrou poder discriminatório relativamente às anemias microcíticas.The iron-deficiency anemia and β-thalassemia minor are the most frequent microcytic anemia in laboratory practice and its clinical diagnosis is extremely important. The aim of this study was the analysis of the discriminatory power of MAF in the characterization of these anemias. We developed a case control study and were analyzed the blood counts of a group of 84 anemic individuals: 47 with iron deficiency anemia and 37 with β-thalassemia, and a control group consisting of 58 healthy subjects. In the differentiation of pathological groups, only the hemoglobin, the MCV and RDW showed significant differences. MAF has not demonstrated discriminatory power in relation to microcytic anemia

Uneven geographies: exploring the sensitivity of spatial indices of residential segregation

There has been extensive use of segregation indices for measuring residential segregation since the 1950s, with continuous progress made in the field. Recent developments include the propositions of spatial global and local versions of traditionally used segregation indices, which have opened avenues for representing and analysing segregation as a multiscale and spatially-varying phenomenon. Much less explored has been the issue of how important research design choices, such as the extent of geographical boundaries, grouping systems and scales of analysis, can influence the measurement of segregation. This paper contributes in this direction by investigating the impact of such decisions in the outcomes of the indices of generalized dissimilarity (D) and information theory (H) using a set of sensitivity analysis. Using a comparative study between London and São Paulo as basis, results obtained with different geographical boundaries, grouping systems and scales for the two indices are analysed visually and quantitatively. Results suggest that although D and H depict the same spatial dimension of segregation (unevenness/clustering), they present different sensitivity to geographical boundaries and grouping systems. The study also revealed how the two indices unfold different aspects of the segregation, which impact on their interpretation and applicability. The study concludes with a discussion of the considerations on research design choices concerning the interpretation of the results, which indicate the two indices should not be used interchangeably

Role of transcription factors in the functional development of gamma-delta T lymphocytes

Tese de mestrado em Bioquímica, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2014O contacto contínuo com o exterior e a vasta exposição a patogéneos levou a que, durante a evolução, organismos superiores desenvolvessem mecanismos de protecção especializados. O sistema imunitário, constituído por um vasto número de células e tecidos especializados, pode ser subdividido em dois grupos – sistema imune inato ou adaptativo – de acordo com o tipo de resposta que é desenvolvido. As células do sistema imune inato, maioritariamente localizadas em locais de alto contacto com o exterior (p.e. o epitélio), caracterizam-se pela sua resposta não especializada – e portanto, inata – que permite um rápido controlo de infecções. As células T γδ, natural killer (NK) e macrófagos são exemplos de células pertencentes a este tipo de imunidade. Por outro lado, células do sistema imune adaptativo como as células T e células B, possuem a capacidade de desenvolver uma resposta mais duradora e especializada, que lhes permite não só combater mais eficazmente uma infecção mas também desenvolver uma memória imunitária. Uma característica funcional partilhada entre as células do sistema imune inato e adaptativo é a produção de citocinas. A sua produção e consequente secreção permitem uma melhor e mais eficaz resolução de uma infecção, através do recrutamento e activação de células do sistema imune para o local afectado. Os linfócitos T γδ em conjunto com os linfócitos T αβ CD4, produzem citocinas pro-inflamatórias como o IFN-γ e a IL-17A. Todavia, as células T γδ distinguem-se dos últimos pela sua rápida capacidade de resposta a estímulos externos, através da produção e secreção de citocinas na periferia. Esta característica advém da diferenciação dos seus progenitores em células T γδ especializadas na produção de IFN- γ (CD27+) ou de IL-17A (CD27-) no timo, ao passo que linfócitos T CD4 abandonam o timo sob a forma de linfócitos naïve, necessitando de estímulos prolongados para que se diferenciem em linfócitos T efectores. Os mecanismos moleculares que regulam os processos de diferenciação e produção de citocinas encontram-se extensamente estudados em linfócitos T αβ. O factor de transcrição T-bet, por exemplo, regula a diferenciação dos linfócitos T CD4 em linfócitos Th1 CD4 bem como a produção de IFN-γ. Contudo, pouco é conhecido relativamente aos reguladores da produção de citocinas nos linfócitos T αβ. Por esta razão propusemo-nos estudar o papel de alguns dos factores de transcrição na regulação da transcrição de citocinas como o IFN- γ e IL-17A. O paralelismo entre os linfócitos Th1 CD4 produtores de IFN- γ e os linfócitos T γδ 27+ e entre os linfócitos Th17 CD4 produtores de IL-17A e os linfócitos T γδ27- levou-nos a escolher como objecto de estudo vários factores de transcrição associados à produção destas citocinas nos linfócitos T CD4. Tendo isto, escolhemos o T-bet e o factor de transcrição Eomes, envolvido na produção de IFN-γ em linfócitos T CD8. Associados à diferenciação dos linfócitos T CD4 em Th17, vários factores de transcrição foram ainda associados à regulação da transcrição de IL-17A nestas mesmas células. De entre estes os factores de eleição para o nosso estudo foram o ROR-γt, BATF e o RORα. De modo a estudar o papel de cada factor de transcrição nos linfócitos Tγδ usámos ratinhos geneticamente modificados, nos quais cada um destes factores de transcrição se encontra deletado. Para o estudo do factor de transcrição Eomes, recorremos ao uso de ratinhos nos quais apenas células que expressam o gene RAG1 - células T e B - apresentam a deleção específica para o factor de transcrição Eomes, visto a deleção total ser letal durante a embriogénese. Através de estudos in vitro usando diversas condições de estimulação (citocinas e anticorpos monoclonais), foi-nos possível aferir quais destas permitem induzir a produção de IFN-γ em linfócitos T γδ27+ e de IL-17A em linfócitos T γδ27-. De forma a determinar o impacto que a ausência de cada factor de transcrição teria na produção de IFN-γ e IL-17A, optámos pelo o uso dos anticorpos monoclonais anti-CD3 e anti-CD28 no caso dos linfócitos T 27+ e das citocinas IL-1β mais IL-23 no caso dos linfócitos T γδ27-. É de salientar que na presença de IL-1β e IL-23 os linfócitos T γδ27-, como já anteriormente descrito pelo laboratório, demonstraram não só a capacidade de produzir outras citocinas em simultâneo – como a IL-17F e a IL-22 – mas também a capacidade de co-produzir IFN-γ e IL-17A. Os nossos resultados in vitro demonstraram que, na ausência de T-bet, os linfócitos T γδ 27+ possuem a mesma capacidade de produção de IFN-γ apesar de o número de linfócitos que produz esta citocina ser menor. Este resultado sugere que os linfócitos T γδ27+ possam depender parcialmente do T-bet. Por outro lado, a ausência do factor de transcrição Eomes não revelou diferenças na produção de IFN-γ, demonstrando que os linfócitos T γδ27+ não requerem Eomes para a produção de IFN- γ. Já a produção de IFN-g pelos linfócitos T γδ27- não sofreu quaisquer alterações na ausência tanto do factor de transcrição T-bet assim como na do Eomes. Estes resultados sugerem então que estes linfócitos apresentam um diferente mecanismo na regulação da transcrição do IFN-γ. Contudo, as experiências in vitro nem sempre replicam a realidade in vivo. Por esta razão e com o intuito de compreender os mecanismos de regulação da produção destas citocinas recorremos a dois modelos murinos – EAE e Listeria monocytogenes – nos quais foi demonstrada a presença de linfócitos T γδ27- produtores de IFN- γ. Contudo, o modelo experimental de esclerose múltipla (EAE), não nos permitiu observar a produção de IFN- γ em linfócitos T γδ. No entanto, através do uso do modelo de infecção (Listeria monocytogenes) foi possível observar que a ausência de T-bet leva a um desaparecimento completo das células co-produtoras de IFN- γ e IL-17A. Estes resultados sugerem assim, que linfócitos T γδ27- requererem o factor de transcrição T-bet para a produção de IFN- γ. A análise da produção de IL-17A em linfócitos T γδ27- demonstrou que estes são inteiramente dependentes do factor de transcrição ROR γt. Verificámos ainda que esta dependência não se encontra limitada à produção de IL-17A estendendo-se também ao desenvolvimento de uma população específica de linfócitos T γδ27- que apenas produz IL-17A, designada CCR6+ γδ27-. Foi também possível observar que os linfócitos T γδ27- não requerem os factores de transcrição BATF e RORα para a produção de IL-17A. Durante esta análise, contrariamente ao esperado, foi ainda detectado um aumento no número de linfócitos T γδ27- que produziam IL-17A na ausência do RORα. Estes resultados levaram-nos a prosseguir um estudo mais detalhado sobre o papel do RORα em linfócitos T γδ27-. Para estudar o papel do factor de transcrição ROR em células T γ foram usados ratinhos que expressam uma forma truncada, não funcional, do factor RORα. Ao investigar o papel do RORα nos linfócitos T γδ, deparámo-nos que o aumento no número de células produtoras de IL-17A não se devia a um impacto na diferenciação dos linfócitos T CCR6+ γδ27-. No entanto, observámos um aumento da proporção de linfócitos T γδ expressando a cadeia Vγ4 (maioritariamente produtores de IL-17A) e uma diminuição na proporção de linfócitos T γδ expressando a cadeia Vγ1 (maioritariamente produtores de IFN- γ) no seu TCR. Este aumento foi não só detectado na periferia como também no timo, em linfócitos T γδ imaturos (CD24+), sugerindo a existência de um papel do ROR no rearranjo das cadeias gamma do TCR dos linfócitos T γδ. Mais ainda, podemos observar que o aumento no número de linfócitos produtores de IL-17A, após estimulo com IL-1β mais IL-23 durante a noite, não se devia apenas a um aumento do número de linfócitos Vγ4, mas também a um aumento do número de células produtoras de IL-17A de entre a população Vγ1-Vγ4-, que acreditamos ser constituída por linfócitos T Vγ6+ γδ. Estes resultados sugerem assim que o factor de transcrição RORα possui dois papéis distintos em linfócitos T γδ , através do controlo do rearranjo das cadeias gamma dos linfócitos T γδ e da regulação da produção de IL-17 em linfócitos T V 1-Vγ 4- γδ. Em suma, os nossos resultados sugerem a existência de algumas semelhanças nos mecanismos de regulação da produção de IL-17A e IFN-γ entre os linfócitos Th1 CD4 e os linfócitos T γδ27+ e γδ27-. Especificamente, estes resultados parecem sugerir um papel do factor de transcrição RORa no desenvolvimento e produção de IL-17A em linfócitos T γδ.γδ T cells are a major source of the proinflammatory cytokines IFN- γ and IL-17, together with αβ CD4 T helper cells. However in stark contrast with the latter, one of the main features of γδ T cells is their briskness at cytokine production in the periphery. This is mostly attributable to their programmed phenotype(s) that distinguishes IFN- γ-producing CD27+ (γδ27+) and IL-17-producing CD27- (γδ27-) subsets. Importantly, γδ27+ cells are stably committed to express Ifng but not Il17, whereas γδ27- cells spontaneously make IL-17 but can be induced to produce IFN-γ (as well as IL-17F, IL-22, GM-CSF) under specific inflammatory conditions. Our understanding of the transcriptional regulators of the production of these cytokine in both γδ T cell subsets lags behind that of CD4 T cells. Here we show that γδ T cells do not rely entirely on the same transcriptional mechanisms for their functional differentiation. Remarkably, IFN- γ production by both γδ27+ and IL17+ γδ27- T cells relies on the Th1 transcription factor (TF) T-bet but is dispensable of Eomes. This suggests a T-bet-dependent module for IFN- γ production shared by conventional CD4 T cells and innate-like γδ T cells. By contrast and to our surprise, regarding the Th17 TFs and IL-17 production, neither BATF nor RORα showed to be required by γδ27- T cells, which appear to depend solely on RORγt. Interestingly, mice lacking RORα showed an increased number of IL-17-producing Vγ1-Vγ4- cells upon stimulation as well as a change in the proportion of Vγ4+ and Vγ1+ γδ T cells. Together our findings illustrate a simpler mechanism for regulation of cytokine production by γδ T cells which allows a faster response to stimulus. In addition, our work revealed a role for RORα in the development of certain γδ T cell subsets as well as in the functional differentiation of IL-17-production

Implementation of methodologies for Vibrio spp. detection in microalgae production

Tese de mestrado, Microbiologia Aplicada, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2019As microalgas apresentam capacidade de produzir uma variedade de compostos de alto valor económico. Contudo, a contaminação das culturas com bactérias representa um problema critico na produção a escala industrial, uma vez que a presença de organismos potencialmente patogénicos pode impossibilitar a entrada dos produtos no mercado. De forma a estabelecer a qualidade da biomassa produzida, e de fundamental importância a implementação de métodos de deteção de possíveis contaminantes. O facto da bactéria vibrio se encontrar amplamente difundida em ambientes aquáticos torna-a num possível contaminante das culturas de microalgas. Devido a sua capacidade de infetar não só animais mas também seres humanos, as contaminações representam uma ameaça preocupante para a saúde humana. Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus e V. vulnificus representam as espécies detetadas com maior frequência e responsáveis por um aumento mundial de infeções transmitidas por alimentos marinhos. A sua ausência na biomassa de microalgas produzida para alimentação e rações e crucial e, consequentemente, a sua detecção deve basear-se em métodos eficazes. Como consequência do aumento da produção de microalgas, o objetivo principal desta dissertação foi implementar métodos internos para detetar estas três espécies de Vibrio na biomassa de microalgas. O principal método testado consistiu na ISO (International Organization for Standardization) 21872-1: 2017, baseado na presença/ausência da bactéria, de forma a satisfazer a exigência dos clientes por um método oficial. O objetivo final foi inferir se compensa implementar as análises no laboratório da A4F ou se seria preferível solicitar a sua realização a um laboratório externo de referência. Primeiramente, foram implementadas as medidas de biossegurança requeridas para trabalhar com microrganismos de risco II no laboratório da A4F. As duas partes da ISO/TS 21872-1:2007 foram compiladas num único documento, a ISO 21872-1:2017, dedicada a deteção de V. cholerae, V. parahaemolyticus e V. vulnificus. Atendendo ao facto de todas as análises previamente realizadas pelo laboratório externo terem fornecido um resultado negativo para a deteção das espécies de Vibrio, era expetável a sua ausência na biomassa. Consequentemente, o objetivo era inferir o número de etapas necessárias para descartar falsos positivos. Para tal, as amostras analisadas foram previamente testadas pelo laboratório de referência como negativas. O método da ISO 21872-1:2017 compreendeu quatro etapas principais: enriquecimento seletivo, isolamento, identificação e confirmação. Os dois enriquecimentos seletivos sucessivos foram realizados em água peptonada salina alcalina (ASPW) e as posteriores etapas de isolamento e identificação consistiram no plaqueamento em TCBS e num segundo meio seletivo, CHROMagarTM. Em relação aos controlos positivos, as colonias obtidas em CHROMagarTM corresponderam ao esperado. Em TCBS, tirando o facto de as colonias de V. cholerae serem menores do que era descrito, V. cholerae e V. parahaemolyticus originaram colónias típicas. Contrariamente, as colónias de V. vulnificus apresentaram uma coloração amarela em detrimento de verde. Posteriormente, todos os controlos positivos foram confirmados por PCR e esta discrepância justificada pelo facto de algumas estirpes de V. vulnificus fermentarem sacarose, resultando na coloração amarela. Conclui-se assim que a fermentação de sacarose não representa um factor discriminatório. Não obstante, visto que o objetivo era detetar todas as espécies abrangidas pela ISO 21872-1:2017, o método não foi influenciado. Na análise das amostras, o enriquecimento seletivo seguido de plaqueamento em CHROMagarTM e TCBS demostrou menos seletividade do que declarado pelos fabricantes, considerando que permitiu o desenvolvimento de uma ampla gama de colonias de falsos positivos com dimensões iguais ou inferiores a 1 mm. Visto que o controlo positivo de V. cholerae apresentou colonias menores do que o expetável em TCBS, o tamanho das colonias típicas foi negligenciado como fator discriminatório e todas as colonias verdes e amarelas em TCBS e roxas ou azuis em CHROMagarTM prosseguiram para as etapas de confirmação, resultando num método demorado. Contudo, verificou-se realmente uma discrepância entre o tamanho das colonias da amostra (1 mm ou inferior) e o tamanho esperado (2 - 3 mm) em TCBS e apenas foram obtidos aglomerados roxos ou azuis em CHROMagarTM sem colonias isoladas. Essas evidências, aliadas ao facto de que V. cholerae apresentou colonias típicas em CHROMagarTM, poderiam indicar que essas colonias não eram as espécies de Vibrio em teste. Contudo, era necessário confirmação adicional. A etapa de confirmação consistiu nos testes de coloração de Gram, teste de oxidase e ausência/presença de células móveis. O genero Vibrio corresponde a bactérias Gram-negativas, oxidase positivas e com células móveis. Contudo, nem todos os controlos positivos apresentaram células móveis e, consequentemente, este teste tornou-se inviável. Adicionalmente, a incapacidade destes testes de eliminar todos os falsos positivos levou a omissão desta etapa, prosseguindo diretamente para PCR. A conclusão de todas as análises foi “Ausência de V. cholerae, V. parahaemolyticus e V. vulnificus, potencialmente enteropatogénicos, em 25 g da pasta de acordo com a ISO 21872-1: 2017”, coincidindo com os resultados fornecidos pelo laboratório externo de referência. Adicionalmente ao método oficial, o primer para o género Vibrio permitiu inferir que os contaminantes que originaram as colonias de falsos positivos nao pertenciam a este género. Alem disso, apesar do PCR realizado diretamente no enriquecimento secundário não ter detetado nenhuma das três espécies, revelou a presença do género Vibrio, demostrando limitações do método microbiológico. Contudo, considerando que nem todas as bactérias pertencentes ao género Vibrio são potencialmente patogénicas, isto não significava, obrigatoriamente, uma ameaça para a saúde humana. Com o objetivo de inferir se o elevado número de falsos positivos podia originar resultados falsos negativos para deteção de vibrio, a ultima etapa laboratorial consistiu em testar amostras artificialmente contaminadas com 10 Unidades Formadoras de Colonias (UFC) e 100 UFC de cada espécie de Vibrio. Em ambos os meios, foram identificadas colonias típicas, com as dimensões expetáveis. Consequentemente, embora V. cholera tenha originado colonias menores em TCBS, esta espécie formou colonias típicas no segundo meio seletivo. O facto de V. cholerae ter originado colonias típicas em CHROMagarTM confirmou a sua maior eficácia e a importância da complementaridade entre os dois meios. Concluindo, embora haja um elevado numero de colonias de falsos positivos, a diferença de tamanho aliada a complementaridade dos meios permitiu detetar as três espécies de Vibrio e descartar falsos positivos, incluindo as colonias com menos de 1 mm em TCBS. Quanto a comparacao entre PCR realizado diretamente no segundo enriquecimento e o método oficial, apenas V. cholerae apresentou discrepância. Esta espécie foi detetada em CHROMagarTM, mas não foi detetada no enriquecimento. Isso demostra que nenhum método e ideal e que a realização de PCR diretamente em suspensões de enriquecimento não e, por si só, um método passível de substituir o método da ISO 21872-1: 2017. Por último, de forma a averiguar a viabilidade económica da realização das análises internamente, em detrimento da sua requisição a um laboratório de referencia, realizou-se a analise financeira do método. O custo da realização da análise no laboratório da A4F demostrou ser aproximadamente três vezes superior ao preço providenciado pelo laboratório externo. Como tal, não compensava financeiramente a implementação interna deste método. Como perspectivas futuras, e expetável o desenvolvimento e aprovação de novos métodos oficiais que poderão ser mais favoráveis economicamente. Paralelamente, considerando os recursos disponíveis, o segundo objetivo consistiu em utilizar sondas de hibridização fluorescente in situ (FISH), fornecidas pela Biomode SA, como método de deteção de V. vulnificus, V. parahaemolyticus e V. cholerae diretamente em amostras de cultura de microalgas. Durante a otimização do protocolo, um dos problemas enfrentados foi a autofluorescência da clorofila nas microalgas. Para solucionar este problema, o Negro Sudão B foi testado, com sucesso, como tratamento de redução da autofluorescência. De modo a inferir o limite de deteção do método, foi obtida a seguinte correlação entre UFC e Densidade Ótica (DO): UFC = (109) ・ (DO) + 7 ・ 108. Em seguida, as amostras de Nannochloropsis foram artificialmente contaminadas com diluições seriadas de concentrações conhecidas de V. parahaemolyticus. O limite de deteção obtido, 106 CFU mL-1, encontrou-se dentro do valor esperado em microscopia de fluorescência. Em todas as amostras testadas, vibrio nunca foi detetado em pastas de biomassa da A4F, possivelmente como consequência de Nannochloropsis apresentar capacidade de suprimir quantitativamente e qualitativamente o crescimento de algumas espécies de Vibrio. Deste modo, mesmo que vibrio estivesse presente, seria expetável que as UFC mL-1 permanecessem em valores reduzidos. Consequentemente, seria necessário uma etapa de enriquecimento, por exemplo em ASPW. Contudo, juntamente com o pré-requisito das etapas adicionais para inibição da autofluorescência das microalgas, o método demostrou ser demorado e com um limite de deteção acima dos valores esperados nas culturas. Portanto, a menos que vibrio se tornasse numa contaminação comum em culturas na A4F, não seria necessário a realização de análises de rotina. Adicionalmente, este método só poderia ser implementado como análise de rotina se as contaminações de vibrio apresentassem uma elevada carga bacteriana, considerando que teria de ser superior a 106 UFC mL-1 para ser detetado. Caso estas espécies de Vibrio fossem detetadas, as culturas seriam descartadas imediatamente, permitindo economizar futuros recursos em culturas que não poderiam ser comercializadas. Como perspetivas futuras, deveriam ser desenvolvidas sondas com diferentes fluorocromos, como por exemplo fluorescamina.Considering the increasing microalgae production, the main goal of this dissertation was to implement methods to detect Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus, and V. vulnificus in microalgae biomass. To satisfy the customers’ request for a standard method, the International Organization for Standardization (ISO) 21872-1:2017 was chosen. The final goal was to infer if it was profitable to implement the method at A4F’s laboratory rather than asking a reference laboratory. A positive result for Vibrio spp. was never previously obtained and so its absence was expected in the biomass. The aim was to understand the number of steps required to rule out false positives on samples previously tested as negative by the reference laboratory. The method comprised four main steps: selective enrichment in Alkaline Saline Peptone Water (ASPW), isolation and identification in Thiosulfate Citrate Bile and Sucrose (TCBS) agar and CHROMagarTM and, lastly, the confirmation steps. The selective enrichment step followed by plating on CHROMagarTM and TCBS were not as selective as stated by manufactures and allowed the growth of a wide range of false positive colonies with 1 mm or less. Since V. cholerae positive control presented smaller colonies on TCBS, the size of colonies was first neglected as a discriminatory factor. Although some evidences indicated that these colonies were not Vibrio spp., further confirmation was required. The confirmation step started with Gram staining, oxidase test and examination of motility. The inability of these tests to rule out all false positives led to the non-inclusion of these steps and advancing directly to PCR. The conclusion of all the analysis was that “Potentially enteropathogenic V. cholerae, V. parahaemolyticus and V. vulnificus were not detected in 25 g of the paste according to the ISO 21872-1:2017”. Additionally to the official method, the contaminants colonies did not belong to the genus Vibrio but that genus was detected by PCR in the secondary enrichment samples, which showed some limitations of the platting method. Even though, since not all bacteria belonging to the genus Vibrio are pathogenic, it did not mean, for itself, a threat to the human health. Lastly, spiked samples with the three Vibrio spp. were tested. Even though a high number of false positive colonies was present, the difference in size along with the complementarity of both media allowed to detect the three Vibrio spp. and to rule out false positives, including the colonies with less than 1 mm. The comparison between direct PCR to the enrichment broths and the official method proved that no method is ideal and PCR screening of enrichment broths was not, for itself, a reliable method to replace the ISO method. Ultimately, the financial analysis stated that the cost per analysis was approximately three times higher than the price provided by the reference laboratory. Hence, it was not cost-effective to implement the method. Additionally, Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) probes provided by Biomode SA were tested as a method to detect V. vulnificus, V. parahaemolyticus and V. cholerae directly in microalgae culture samples. The detection of Vibrio spp. would lead to the disposal of these cultures in order to avoid further costs in cultures that could not be commercialized. To counteract the autofluorescence of chlorophyll in the microalgae, Sudan Black B was successfully tested. The limit of detection obtained, 106 CFU mL-1, was within the value expected for microscopic observation. Although, the requirement of an enrichment step, together with the prerequisite of the additional steps to inhibit the autofluorescence, turned the method time-consuming and with a detection limit above the expected values for Vibrio spp. in the cultures

The role of caregiver identity: effects on well-being and burden

Several factors that explore the consequences of caregiving on caregivers’ well-being have been studied in these last few years. However, the effects of caregiving on an individual’s self-concept and social identity have not been sufficiently explored.The goal of the present study is to address this issue and determine whether the existence of multiple nonconflicting identities, could have an effect on caregiver’s well-being and burden. The identities that were tested in this study were of adult child, caregiver and worker, for the existing literature indicates that these can be important in the caregiving context. Following the proposal of the study conducted by Brook et. al. (2008) our hypotheses was that the importance of these identities should affect well-being and perceived burden, particularly when they have less harmony between them. These effects should be mediated by self-discrepancies emotions. For this study a total of 40 caregivers of their elder parents were interviewed, and data was collected, using a telephone based procedure. Contact with participants was made through three institutions that provide home help services to the care recipients. Only working, adult-child caregivers were considered for this study, in order to fully test the identities mentioned. A series of instruments were applied in order to test an adapted model (Brook et. al., 2008) which aimed to verify an interaction between the importance of identities, identity harmony and their effect on Well-Being and Caregiving Subjective Burden (CB). Emotions related to self-discrepancies were also included in this model, as a mediator of this interaction. As expected, results indicated a significant interaction between the caregiver and the worker identities’ importance and harmony on caregiver burden. We did not find any effects regarding the relationship between the importance of son/daughter identities. Moreover, no effects were found regarding the mediation effect by self-discrepancy emotions. These results are discussed based on the social psychological and caregiving literatures.Vários factores que exploram as consequências da prestação de cuidados no bem-estar de cuidadores informais têm sido estudados nestes últimos anos, embora os efeitos da prestação de cuidados na identidade social e auto-conceito de um indivíduo não tenham sido ainda suficientemente explorados. O objetivo do presente estudo foi determinar se a existência de múltiplas identidades não conflituosas, poderia ter um efeito sobre o bem-estar e sobrecarga do cuidador. As identidades que foram testadas neste estudo foram a de cuidador, a de filho(a), e a de trabalhador, pois a literatura existente indica que estes podem ser importantes no contexto da prestação de cuidados. Seguindo a proposta do estudo realizado por Brook et. al. (2008) a nossa hipótese indicava que a importância dessas identidades deveria afectar o bem-estar e a sobrecarga percebida, principalmente quando estas identidades têm menos harmonia entre elas. Pressupõe-se também que estes efeitos sejam mediados pelas emoções auto-discrepantes. Para este estudo um total de 40 cuidadores (n = 40) dos seus pais idosos foram entrevistados e os dados foram recolhidos utilizando um procedimento baseado no contacto telefónico. O contacto com os participantes foi estabelecido através de três instituições que prestam serviços de apoio domiciliário aos respectivos idosos. Apenas cuidadores que desempenhavam funções profissionais e eram filho(a) do receptor dos cuidados, foram considerados para este estudo, a fim de testar por completo as identidades mencionadas. Uma série de instrumentos foram aplicados a fim de testar um modelo adaptado, que teve como objetivo verificar a interação entre a importância das identidades, harmonia entre as identidade e os seus efeitos no bem-estar e sobrecarga subjetiva dos cuidadores. Emoções relacionadas com auto-discrepâncias foram também incluídas neste modelo, como um mediador desta interacção. Como esperado, os resultados indicaram uma interacção significativa entre a importância e harmonia das identidades de cuidador/ trabalhador na sobrecarga do cuidador. Não se verificou qualquer efeito na relação entre a importância da identidade de filho(a). Não se constatou também qualquer efeito de mediação das emoções auto-discrepantes. Estes resultados são discutidos com base na literatura relacionada com a psicologia social e cuidadores informais

Over the influence : comparing the effects of digital influencers brand ownership strategies with brand endorsement strategies.

As customers’ spending habits move towards online platforms, brands are investing in their digital connection to customers, especially through social media. In this context, brands are using their digital tools to communicate, engage and ultimately build stronger relationships with their customers. Due to the fast rise of social media, digital influencers have gained a strong voice, which gave them a privileged position to communicate effectively with their audience. With this and through endorsements, brands have increasingly been using influencers as communication touchpoints for their targets. However, some influencers have taken the bar higher by going solo and are now using their large audience and strong reputation to launch their own ventures. With this in mind, the research objectives strive to address one main goal: to understand if (and how) the relationship of the influencer with a brand (owner vs endorser) affects the customer’s brand attitude and purchase intentions. The current thesis developed an online questionnaire with 149 respondents and quantitative data was collected by randomly exposing the sample to two different scenarios: influencer as brand endorsers compared to influencers as brand owners. Results show that influencers´ ownership has a significant but lower effect on Purchase Intention and Brand Attitude when compared with influencers´ endorsement. Additionally, Perceived Quality, Brand Anthropomorphism and Brand Attachment present a significantly positive correlation with Purchase Intention and Brand Attitude. However it was concluded that these were not possible explaining factors for the significantly different results found.Com a evolução dos hábitos de consumo no sentido das plataformas digitais, as marcas estão a investir na ligação digital aos consumidores, especialmente através das redes sociais. Neste contexto, as marcas estão a utilizar ferramentas digitais para comunicar e fortalecer ligações com os consumidores. Devido ao crescimento das redes sociais, os influenciadores digitais ganharam preponderância, o que os colocou numa posição privilegiada para comunicar de forma eficaz com o seu público. Consequentemente, as marcas têm utilizado influenciadores como pontos de contacto para os seus targets, tornando-os os seus brand endorsers. Contudo, alguns influenciadores foram mais longe, ao utilizar as suas fortes reputações e alcance para lançar as próprias marcas. Assim, o objetivo desta investigação é entender se (e como) a relação do influenciador com a marca (criador da marca vs endorser) influencia a Brand Attitude e Intenção de Compra dos consumidores. Para tal, foi desenvolvido um questionário com 149 participantes e foram recolhidos dados quantitativos através da exposição aleatória da amostra a dois cenários: os influenciadores como brand endorsers comparando com os influenciadores como criadores das marcas. Os resultados obtidos mostram que a comunicação dos influenciadores como criadores de marcas tem um efeito significativo, mas inferior na Intenção de Compra e Brand Attitude quando comparado com a comunicação dos mesmos como brand endorsers. Adicionalmente, a Perceção de Qualidade, Brand Anthropomorphism e Brand Attachment têm uma correlação significativamente positiva com Intenção de Compra e Brand Attitude. Contudo, estes não podem ser considerados possíveis fatores explicativos para a diferença significativa nestes encontrada

The relationship between responsible leadership and organizational citizenship behavior in the hospitality industry

The purpose of this study is to explore the mediating role of the perception of social responsibility, and organizational identification, in the relationship between responsible leadership and organizational citizenship behavior in the hospitality industry. A questionnaire was answered by 214 frontline employees of four and five-star hotels, in the north of Portugal. Results indicate that there is a mediation model, which uses the effect of the perception of social responsibility and organizational identification in the relationship between responsible leadership and organizational citizenship behaviors. This study is a first attempt to propose a parallel multiple mediator model that explores the effect of hotel frontline employees’ perceptions of the importance of social responsibility, as well as the effect of employees’ identification with the organization, both of which act as mediators in the relationship between responsible leadership and OCB in the hospitality industry